酵母单杂交技术是由酵母双杂交GAL4系统衍生发展而来,是一种在体内检测DNA与蛋白质之间相互作用的强大分子生物学工具。将您感兴趣的顺式作用元件 或DNA片段(称为“诱饵”)克隆到一个报告载体上。该载体包含一个缺乏天然启动子的报告基因,最常用的是AbAr,His3。将您要筛选的转录因子或蛋白的cDNA(称为“猎物”)克隆到表达载体上,该载体带有一个激活结构域,最常见的是酵母GAL4转录因子的激活域。将构建好的“诱饵”载体转入酵母报告菌株。该菌株本身由于报告基因无法表达,在特定的缺陷培养基(如缺乏组氨酸的培养基)上不能生长。再将“猎物”载体转入含有“诱饵”的酵母菌中。如果“猎物”蛋白能够特异性结合到“诱饵”DNA序列上,其携带的激活域就会在酵母中开始转录,从而启动报告基因的转录和表达。
①简介:在植物体系中,我司目前主要使用pHis、pAbAi两种单杂系统。
系统 | 菌种 | 载体 | 转化标记 | 报告基因 | 抑制剂 |
pAbAi | Y1HGold | pAbAi pGADT7 | Ura Leu | AbAr | AbA |
pHis2 | Y187 | pHis2 pGADT7 | Trp Leu | His3 | 3-AT |
②载体构建周期:约7-14个工作日
③适用场景:
1.验证已知的DNA与蛋白质之间是否存在特异性相互作用。
2.能够高效地筛选并鉴定出与特定顺式调控元件等短DNA位点结合的新蛋白编码基因。
3.用于精确定位已证实存在1相互作用的蛋白其DNA结合结构域,并精确界定其结合的特定核酸序列。
④结题标准:目的片段构建至目的载体上,即构建完成。
⑤实验交付内容:
1、单杂交载体的表达核序列信息和注释信息;
2、单杂载体的测序结果;
3、单杂载体:一份质粒、一份大肠杆菌菌液(25%甘油菌);
1、载体构建经验丰富,采用无缝克隆组装。极大节省您的研究时间。
2、为每个项目量身定制最优实验方案,无论是复杂启动子分析还是特殊物种基因筛选,我们都有信心应对。
3、建立项目专属沟通群,实验进程实时同步,数据结果清晰可溯。
业务 | 样品类型 | 要求 | 邮寄条件 | 备注 |
载体构建 | 质粒 | ≥4微克 | 冰袋 | (1)提供测序结果 (2)标明载体抗性 |
大肠杆菌甘油菌 | ≥500微升 | 冰袋 | (1)提供测序结果 (2)标明菌液抗性 (3)提供活性好的菌液 | |
种子 | ≥25粒 | 常温 | (1)提供近一年内所收的颗粒饱满的种子 (2)发芽率>90% | |
植物组织 | (1)≥3克 (2)新鲜嫩绿 | 干冰 | 新鲜样品取完后迅速液氮冷冻 | |
果实 | (1)≥1个 (2)新鲜 | 常温 | 新鲜果实,颗粒饱满 | |
cDNA | ≥20微升 | 干冰 | (1)无其他核酸污染 (2)可扩增出目的基因 | |
基因组DNA | ≥20微克 | 干冰 | (1)OD260/280=1.8-1.9 (2)OD260/230=1.9-2.2 |