技术原理

酵母单杂交技术是由酵母双杂交GAL4系统衍生发展而来,是一种在体内检测DNA与蛋白质之间相互作用的强大分子生物学工具。将您感兴趣的顺式作用元件 或DNA片段(称为“诱饵”)克隆到一个报告载体上。该载体包含一个缺乏天然启动子的报告基因,最常用的是AbAr,His3。将您要筛选的转录因子或蛋白的cDNA(称为“猎物”)克隆到表达载体上,该载体带有一个激活结构域,最常见的是酵母GAL4转录因子的激活域。将构建好的“诱饵”载体转入酵母报告菌株。该菌株本身由于报告基因无法表达,在特定的缺陷培养基(如缺乏组氨酸的培养基)上不能生长。再将“猎物”载体转入含有“诱饵”的酵母菌中。如果“猎物”蛋白能够特异性结合到“诱饵”DNA序列上,其携带的激活域就会在酵母中开始转录,从而启动报告基因的转录和表达。


服务流程

服务介绍

①简介:在植物体系中,我司目前主要使用pHis、pAbAi两种单杂系统。

系统

菌种

载体

转化标记

报告基因

抑制剂

pAbAi

Y1HGold

pAbAi

pGADT7

Ura

Leu

AbAr

AbA

pHis2

Y187

pHis2

pGADT7

Trp

Leu

His3

3-AT

②载体构建周期:约7-14个工作日

 

③适用场景:

1.验证已知的DNA与蛋白质之间是否存在特异性相互作用。

2.能够高效地筛选并鉴定出与特定顺式调控元件等短DNA位点结合的新蛋白编码基因。

3.用于精确定位已证实存在1相互作用的蛋白其DNA结合结构域,并精确界定其结合的特定核酸序列。

 

④结题标准:目的片段构建至目的载体上,即构建完成。

 

⑤实验交付内容:

1、单杂交载体的表达核序列信息和注释信息;
2、单杂载体的测序结果;
3、单杂载体:一份质粒、一份大肠杆菌菌液(25%甘油菌);


服务优势

1、载体构建经验丰富,采用无缝克隆组装。极大节省您的研究时间。

2、为每个项目量身定制最优实验方案,无论是复杂启动子分析还是特殊物种基因筛选,我们都有信心应对。

3、建立项目专属沟通群,实验进程实时同步,数据结果清晰可溯。


样品要求

业务

样品类型

要求

邮寄条件

备注

载体构建

质粒

≥4微克

冰袋

(1)提供测序结果

(2)标明载体抗性

大肠杆菌甘油菌

≥500微升

冰袋

(1)提供测序结果

(2)标明菌液抗性

(3)提供活性好的菌液

种子

≥25粒

常温

(1)提供近一年内所收的颗粒饱满的种子

(2)发芽率>90%

植物组织

(1)≥3克

(2)新鲜嫩绿

干冰

新鲜样品取完后迅速液氮冷冻

果实

(1)≥1个

(2)新鲜

常温

新鲜果实,颗粒饱满

cDNA

≥20微升

干冰

(1)无其他核酸污染

(2)可扩增出目的基因

基因组DNA

≥20微克

干冰

(1)OD260/280=1.8-1.9

(2)OD260/230=1.9-2.2


案例展示

在线询价


基础信息

  • 1. 您可以通过电子邮件、电话或在线与我们联系。
  • 2. 对于批量订单,请发送至邮箱qdsales@wakerbio.com,欢迎电话垂询19863782982。

验证码:

在线留言
服务热线

服务热线

19863782982

微信咨询
二维码