酵母双杂交是一种用于检测蛋白质间相互作用的经典分子生物学技术。其核心原理基于:将转录因子拆解为两个功能独立的结构域—DN结合结构域和转录激活结构域,二者单独存在时均无法启动基因转录。将一个待测蛋白质与DNA结合结构域融合,作为“诱饵”;将另一个待测蛋白质与转录激活结构域融合,作为“猎物”。当这两个蛋白质在酵母细胞核内发生特异性结合时,就会使原本分离的两个结构域在空间上重新接近,从而重建有活性的转录因子,并激活下游报告基因的表达。通过检测报告基因的产物,例如观察酵母能否在缺陷培养基上生长或是否产生颜色反应,就能间接证明蛋白质之间存在直接相互作用。
该技术主要有两大目的。一是验证已知或推测的蛋白质相互作用,为一对一的假设提供直接的体内功能性证据。二是其最强大的应用,即筛选未知的相互作用蛋白:将一个已知的“诱饵”蛋白与一个包含大量不同蛋白质的cDNA文库进行配对,能够高通量地筛选出所有能与“诱饵”结合的新“猎物”蛋白,从而绘制蛋白质相互作用网络。
①简介:在植物核体系双杂交系统中,我司目前使用的为pGADT7与pGBKT7载体。


②载体构建周期:约7-14个工作日
③适用场景:
1.验证已知的蛋白质之间是否存在特异性相互作用。
2.用于筛选并鉴定出与特定蛋白相互作用的新蛋白。
④结题标准:目的片段构建至目的载体上,即构建完成。
⑤实验交付内容:
1、双载体的表达核序列信息和注释信息;
2、双组载体的测序结果;
3、双组载体:一份质粒、一份大肠杆菌菌液(25%甘油菌);
1、载体构建经验丰富,采用无缝克隆组装。极大节省您的研究时间。
2、为每个项目量身定制最优实验方案,无论是复杂蛋白序列还是特殊物种基因,我们都有信心应对。
3、建立项目专属沟通群,实验进程实时同步,数据结果清晰可溯。
业务 | 样品类型 | 要求 | 邮寄条件 | 备注 |
载体构建 | 质粒 | ≥4微克 | 冰袋 | (1)提供测序结果 (2)标明载体抗性 |
大肠杆菌甘油菌 | ≥500微升 | 冰袋 | (1)提供测序结果 (2)标明菌液抗性 (3)提供活性好的菌液 | |
种子 | ≥25粒 | 常温 | (1)提供近一年内所收的颗粒饱满的种子 (2)发芽率>90% | |
植物组织 | (1)≥3克 (2)新鲜嫩绿 | 干冰 | 新鲜样品取完后迅速液氮冷冻 | |
果实 | (1)≥1个 (2)新鲜 | 常温 | 新鲜果实,颗粒饱满 | |
cDNA | ≥20微升 | 干冰 | (1)无其他核酸污染 (2)可扩增出目的基因 | |
基因组DNA | ≥20微克 | 干冰 | (1)OD260/280=1.8-1.9 (2)OD260/230=1.9-2.2 |