DNA拉下实验(DNA Pull-down)是体外研究DNA与蛋白互作的有效方法,可以探究DNA与转录调控蛋白质的互作,最常见的应用是验证启动子与转录因子的互作情况。DNA Pull-down将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,形成磁珠-DNA探针复合体,再与细胞核蛋白孵育,这可以将与DNA结合的蛋白吸附在磁珠上。洗涤去除未结合及非特异性结合蛋白分子后,将与DNA结合的蛋白洗脱下来,得到DNA Pull-down产物,通过Western-blot检测DNA与已知蛋白的互作,也可以通过质谱技术鉴定与DNA片段互作的未知蛋白信息。
①周期:
实验类型 | 实验项目 | 周期 |
DNA Pull-down-WB | DNA标记 | 7-10天 |
DNA Pull-down 富集 | 7-10天 | |
DNA纯化 | 1-2天 | |
WB验证 | 2-3天 |
②适用场景:
1、验证已知DNA与蛋白的互作(如启动子与转录因子的互作);
2、筛选与已知DNA相互作用的未知蛋白。
③结题标准:阳性对照组鉴定到目标蛋白,阴性对照组未鉴定到目标蛋白。
④实验交付内容:
1、实验原始图片;
2、实验报告。
样品类型 | 要求 | 邮寄条件 | 备注 |
质粒 | (1)≥4微克 (2)浓度≥200纳克/微升 (3)OD260/280=1.6-2.0 | 冰袋 | (1)提供测序结果 (2)标明载体抗性 |
种子 | ≥300粒(或≥150克) | 冰袋 | (1)提供近一年内所收的颗粒饱满的种子 (2)发芽率>90% |
组织样本 | (1)≥500微升 (2)OD600≥2.0 | 干冰 | 新鲜样品取完后迅速液氮冷冻 |