泛素是一种小蛋白，当其被特异性的泛素水解酶识别后，会被迅速切割。在膜体系中，泛素被分成两个部分：N端泛素和C端泛素。C端泛素与一个报告蛋白融合，这个报告蛋白通常是一个人工转录因子。在基础状态下，它们彼此分离，报告蛋白无活性。

将第一个待测的膜蛋白“诱饵”与N端泛素融合，并锚定在细胞膜上。将第二个待测的“猎物”蛋白与C端泛素-报告蛋白融合。如果“诱饵”和“猎物”蛋白发生相互作用，就会迫使N端泛素和C端泛素在膜上靠近，重新形成一个完整的、能被水解酶识别的泛素。随后，水解酶会将C端泛素后面的报告蛋白切割下来。被释放的报告蛋白进入细胞核，激活特定的报告基因（如HIS3，LacZ），从而产生可筛选的表型。

因此，膜体系酵母双杂交成功地将蛋白质相互作用的检测场所从细胞核转移到了细胞膜，极大地拓展了Y2H技术的应用范围，使其能够高效地筛选与膜蛋白相互作用的伴侣，在受体信号通路、膜蛋白功能等研究中发挥着关键作用。

①简介： 

质粒准备：诱饵质粒：编码与分裂泛素N端片段融合的已知膜蛋白。猎物质粒：从阳性克隆中回收的候选质粒，编码与分裂泛素C端片段融合的待验证蛋白。对照质粒：包括阳性对照（已知相互作用的质粒）、阴性对照（空载体或无关蛋白质粒）。

共转化与铺板：

将“诱饵质粒”分别与“候选猎物质粒”、“阳性对照”、“阴性对照”共转化到新鲜的酵母报告菌株中。

选择性培养与表型观察：将转化后的菌液点在两种培养基上，双缺培养基（DDO，如SD/-Trp/-Leu）：确保所有转化子都成功含有两种质粒。所有实验组和对照组都应正常生长。四缺培养基（QDO，如SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade）： 这是关键判断依据。只有发生了相互作用的细胞才能在这种苛刻的培养基上生长。

结果分析：

阳性结果：如果“诱饵+候选猎物”组与“阳性对照”组一样，在QDO培养基上正常生长，而“阴性对照”组不能生长，则表明两者之间存在特异性相互作用。阴性结果：如果“诱饵+候选猎物”组与“阴性对照”组一样不能生长，则表明无相互作用。

②实验周期：约4-6周

③适用场景：

1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用；

2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点；

3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白；

4、寻找具有药物治疗作用的小分子多肽；

5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物；

6、绘制蛋白质相互作用图谱。

④结题标准：在无自激活情况下，阴性对照组无互作，同时阳性对照组正常互作，反馈实验组互作结果。

⑤实验交付内容：

1、诱饵质粒，猎物质粒及大肠杆菌菌液（包括测序结果）

2、酵母双杂交实验图片
3、酵母双杂交实验报告

1、载体构建经验丰富，采用无缝克隆组装。极大节省您的研究时间。

2、为每个项目量身定制最优实验方案，无论是复杂启动子分析还是特殊物种基因筛选，我们都有信心应对。

3、建立项目专属沟通群，实验进程实时同步，数据结果清晰可溯。