GST pull-down基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白,“诱饵蛋白”和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。
①周期:
实验项目 | 周期 |
表达载体构建 | 7-14天 |
GST诱饵融合蛋白裂解液制备 | 7天 |
作用蛋白裂解液制备 | 7天 |
GST Pull-down蛋白互相作用 | 7天 |
②适用场景:
1、用于验证两个已知蛋白的相互作用;
2、筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。
③结题标准:阳性对照有条带(信号)以及阴性对照无条带(信号)。
④实验交付内容:
1、重组载体的表达核序列信息和注释信息;
2、重组载体的测序结果;
3、重组载体:一份质粒、一份大肠杆菌菌液(25%甘油菌)。
(上述3点是客户需要构建载体,且客户自身需要才提供。)
4、实验图片:原始蛋白纯化考染图及WB结果图
5、实验报告。
样品类型 | 要求 | 邮寄条件 | 备注 |
质粒 | ≥20微克 | 冰袋 | (1)提供测序结果 (2)标明载体抗性 |
大肠杆菌甘油菌 | ≥500微升 | 冰袋 | (1)提供测序结果 (2)标明菌液抗性 (3)提供活性好的菌液 |