技术原理

GST pull-down基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白,“诱饵蛋白”和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。


服务流程

服务介绍

①周期:    

实验项目

周期

表达载体构建

7-14天

GST诱饵融合蛋白裂解液制备

7天

作用蛋白裂解液制备

7天

GST Pull-down蛋白互相作用

7天

②适用场景:

1、用于验证两个已知蛋白的相互作用;

2、筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。

 

③结题标准:阳性对照有条带(信号)以及阴性对照无条带(信号)。

 

④实验交付内容:

1、重组载体的表达核序列信息和注释信息;
2、重组载体的测序结果;
3、重组载体:一份质粒、一份大肠杆菌菌液(25%甘油菌)。

(上述3点是客户需要构建载体,且客户自身需要才提供。)
4、实验图片:原始蛋白纯化考染图及WB结果图
5、实验报告。


服务优势

样品要求

样品类型

要求

邮寄条件

备注

质粒

≥20微克

冰袋

(1)提供测序结果

(2)标明载体抗性

大肠杆菌甘油菌

≥500微升

冰袋

(1)提供测序结果

(2)标明菌液抗性

(3)提供活性好的菌液


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